اندازه گیری همزمان 25- هیدروکسی کوله کلسیفرول و 25-هیدروکسی ارگوکلسیفرول به روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا

Authors

  • صمدی, محمد
  • کلایی, علی
  • غروی, اعظم
Abstract:

Introduction & Objective: High prevalence of vitamin D insufficiency in Iran calls for a reliable assessment of vitamin D status for diagnostic, research as well as public health purposes. Circulating level of 25(OH)D has been generally accepted as a reliable indicator of vitamin D status. HPLC-based analyses are considered as standard methods for 25(OH)D assays. The aim of this study was to set up a precise, reliable and rather simple HPLC-based method to determine serum levels of 25(OH)D using ultra violet detector. Materials & Methods: Serum proteins were precipitated using ethanol and then methanol: iso-propanol (90:10, v/v). 25(OH)D was then extracted using hexane, which was then evaporated under nitrogen flow. The sediment reconstituted in methanol was further filtered. Finally, 20μL of the filtrate was injected to the column, teknochroma tracer excel 150×4, 3 μm. Chromatography was run with the mobile phase of methanol:water (85:15, v/v) containing 0.01% BHT at the column temperature 40°C. The vitamers 25(OH)D3 and 25(OH)D2 were detected at 265nm. For further evaluation of the method, 90 human serum samples were analyzed for 25(OH)D using HPLC, competitive protein binding assay (CPBA) and radioimmunoassay (RIA). The degree of agreement between those three methods was evaluated using coefficient of correlation and Bland-Altman analysis. Results: Retention times of 25(OH)D3 and 25(OH)D2 were 9.5 and 10.7 min, respectively. Standard curves of both vitamers showed linearity up to 375 nmol/L (D3) and 187.5 nmol/L (D2). Recovery percents for 25(OH)D3 and 25(OH)D2 were found 101±5% and 100.8±5.4%, respectively. Intra- and inter-assay variations for 25(OH)D3 were 8.1% and 12.6%, respectively. The results of RIA and CPBA were significantly higher than those of HPLC (p=0.02). RIA, compared to CPBA, showed more agreement with HPLC. Conclusion: The new HPLC method for serum 25(OH)D determination is reliable and rather fast with the advantage of detecting both 25(OH)D2 and 25(OH)D3.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

اندازه گیری رنگ زرد سانست در فرآورده های حجیم شده بر پایه غلات به روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا

در این مقاله روشی ساده بر پایه کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا برای شناسایی و اندازه گیری رنگ مصنوعی سانست یلو در فراورده های حجیم شده بر پایه ذرت با دستگاه HPLC مجهز به ستون کروماتوگرافی 5μm) C-18 (250mm×4/6mm, ارائه گردید. ابتدا به بررسی پایداری رنگ در اثر ماندگاری در محیط های جداگانه حاوی آب، متانول آمونیاکی و متانول اسیدی توسط دستگاه اسپکتروفتومتری پرداخته شد. سپس پارامترهای جداسازی و آشکا...

full text

کاربرد میکرواستخراج مایع- مایع پخشی و کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا برای اندازه گیری ستریمونیوم بروماید در نمونه های آب

یک روش ساده، سریع و حساس برای اندازه‌گیری ستریمونیوم بروماید در مقادیر ناچیز در نمونه‌های آبی با استفاده از ترکیب   تکنیک میکرو استخراج مایع مایع پخشی (DLLME) و کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC-UV)  توسعه یافت. در این روش مخلوطی از حلال های استخراج کننده و پخش کننده سریعا به درون 10 میلی لیتر محلول آبی تزریق شده و یک محلول ابری شکل می گیرد. بعد از استخراج آنالیت  به د...

full text

استخراج و اندازه گیری همزمان رنگهای مصنوعی از نمونه های بستنی عرضه شده در بازار به روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا

در این پژوهش روشی ساده برای شناسایی و اندازه گیری رنگ های مصنوعی کارمیوزین، سان ست یلو، تارتارازین، برلیانت بلو و کینولین یلو به طور همزمان در بستنی و ژله با دستگاه HPLC مجهز به ستون کروماتوگرافیC-18 ارائه گردید. پارامترهای موثر بر جداسازی و آشکارسازی رنگ ها بررسی و بهینه شدند. مقادیر بهینه به این صورت بدست آمدند: شویش گرادیانت با ترکیب دو فاز متحرک مختلف با ترکیب درصد های مختلف از بافر آمونیوم...

full text

تاثیر 1 و 25 دی هیدروکسی کوله کلسیفرول و عصاره هیدروالکلی پودر شده پنیر باد (Withania Coagulans) بر عملکرد و استحکام استخوان درشت نی جوجه‌های نر گوشتی

  An experiment was conducted to investigate the effects of hydro alcoholic extract of Withania coagulans (WC ) and 1, 25-dihydroxycholecalciferol on performance and bone strength of male broiler chickens. Diets were arranged factorially (2×3×2) consisted of a positive control with adequate Ca (10.4 g/kg diet) and nonphytate P (NPP 5 g/kg diet) exceed the requirements suggested in the Ross 308 ...

full text

اندازه گیری میزان آفلاتوکسین در زعفران به وسیله کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا و تخلیص با ستون ایمونوافینیتی

در این تحقیق یک روش جهت اندازه‌گیری آفلاتوکسین در زعفران با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا مجهز به آشکارساز فلورسانس ارائه شده است. در این روش آفلاتوکسین با استفاده از متانول 80% استخراج و سپس توسط ستون ایمونوافینیتی تخلیص شد. اندازه‌گیری‌ها در طول موج تحریک 365 و طول موج نشری 445 نانومتر انجام گرفت. حد تشخیص آفلاتوکسین‌های B1، B2،  G1و G2</sub...

full text

تعیین میزان فورفورال و هیدروکسی متیل فورفورال در شیرخشک‌های موجود در بازار تهران با روش ریز‌استخراج مایع-مایع پخشی به همراه کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا

سابقه و هدف: اعمال فرآیندهای حرارتی در حین تولید شیرخشک، آن را در معرض ایجاد دو ترکیب فورفورال (F)و هیدروکسی متیل فورفورال (HMF) قرار می‌دهد. سمی بودن این ترکیبات حتی در مقادیر بسیار کم به اثبات رسیده است. هدف از این پژوهش، معرفی و بهینه‌سازی روش ریزاستخراج مایع- مایع پخشی (DLLME) به همراه کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا به عنوان روشی حساس و دقیق جهت شناسایی و تعیین مقادیر بسیار کم فورفورال و...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 15  issue 2

pages  5- 10

publication date 2008-09

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Keywords

No Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023